細胞學實驗考試總結

名詞解釋

1.滲透壓：水從低滲溶液穿過半透膜進入高滲溶液時產生的壓力。水分子通過半透膜向溶

液擴散的現象稱為滲透現象，簡稱滲透；溶液促使膜外水分子向內滲透的力量即為滲透壓。

2.高滲：體內的滲透壓高于體外，水由環(huán)境中向體內擴散，體內的鹽分向外擴散。

通過排泄作用排出多余的水，鹽分通過食物和組織攝入。

3.低滲：體內的滲透壓低于體外，水由體內向環(huán)境中擴散，環(huán)境中的鹽分向內擴散。水和

鈉同時缺失，但缺水少于缺鈉，血清鈉低于正常范圍，細胞外液呈低滲狀態(tài)

4.凝集素：是一類含糖的并能與糖專一結合的蛋白質，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的

作用。凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接，在細胞間形成“橋”的結果，加入與凝集素互補的糖可以抑制細胞的凝集。

5.差速離心：利用不同物質沉降速率的差異，在不同離心速度下分離和收集不同顆粒的離

心技術。常用于分離細胞勻漿中的各種細胞器。6.熒光：某些物質在一定短波長的光的照射下吸收光能進入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時，

就能在極短的時間內放射出比照射光波長更長的光，這種光成為熒光。

7.自發(fā)熒光：有些生物體內的物質受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出熒光，成為自發(fā)熒光。8.次生熒光：有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光材料后同樣也能發(fā)出熒光，這種

熒光稱為次生熒光。

9.活體染色：是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無害的一種染色方法。分為體內

染色和體外染色（超活染色）。

10.細胞培養(yǎng)：在實驗室中用無菌操作的方法將動物體內的組織（或器官）取出，模擬動物

體內的生理條件，在體外進行培養(yǎng)，使其不斷地生長、繁殖，人們借以觀察細胞的生長、繁殖、細胞分化以及細胞衰老等過程的生命現象。

11.組織培養(yǎng)：從機體分離出的組織或細胞在體外人工條件下培養(yǎng)生長的技術。

12.原代細胞培養(yǎng)：是指直接從動物體內獲取的細胞、組織或器官，經體外培養(yǎng)后，直接到

第一次傳代為止。

13.傳代細胞培養(yǎng)：是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉移接種到另一培養(yǎng)瓶

的培養(yǎng)。原代培養(yǎng)形成的單層細胞匯合以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生成空間不足或由于細胞密度過大引起營養(yǎng)枯竭，都將影響細胞的生長，這一程序常稱為傳代或傳代培養(yǎng)。

原理：1.細胞骨架原理細胞骨架是細胞內以蛋白質纖維為主要成分的網絡結構。根據蛋白質纖維的直徑，組成成分和組裝結構的不同可分為微絲微管和中等纖維，其對于維持細胞的形態(tài)結構及細胞運動物質運輸，能量轉換，信號傳導和細胞分裂等有重要的作用，本實驗采用去垢劑TritonX-100的緩沖液處理植物材料，可將細胞膜的膜結構和大部分蛋白質抽提調，但細胞骨架系統蛋白卻被保存下來，后者用R250染色在光學顯微鏡下可見一種網狀結構。

為什么用TritonX-100不用SDS

因為TritonX-100為去污劑，把骨架蛋白以外細胞膜細胞質蛋白剝離掉，無離子性。SDS有離子性，去污性強容易破壞細胞膜。PBS作用：PH保證、與細胞滲透壓相近。戊二醛作用：固定蛋白，保證細胞形狀�？捡R斯亮藍R250作用:與蛋白特異性結合。2．細胞凝集反應:

在某一種蛋白如土豆中，有多個位點可以與其他細胞結合，而且蛋白之間可以聚集，使多個細胞聚集在一起。以PBS液加2%血細胞液作對照試驗因為太稀不容易使紅細胞凝集，太濃分辨不出來是自身堆積在一起還是由于凝集素使其凝集在一起。

3.Feulgen染色原理DNA經弱酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑反應，形成紫紅色的化合物，使細胞內含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應。紫紅色的產生，是由于反應物的分子內含有醌基，醌基是一個發(fā)色團，所以具有顏色。對照組預先用熱三氯醋酸或DNA酶處理，抽提去細胞中的DNA而得到陰性反應，從而證明了Feulgen的專一性。亞硫酸配制：10%偏重亞硫酸鈉水溶液5ml。蒸餾水100ml。1mol/LHCL5ml。

4.傳代細胞培養(yǎng)原理第一步制備細胞懸液，當細胞生長成致密單層時，它很容易被蛋白水解酶和EDTA所破壞。因為EDTA對鈣、鎂離子具親和力，而這兩種離子又是細胞保持緊密結合所必需的因素。所以一般采用胰蛋白酶和EDTA的混合物，作為消化液。培養(yǎng)基用EMEM液(90%)犢牛血清(10%)雙抗、3%谷氨酰胺1ml、7.4%NaHCO3（PH7.0~7.2）.其核心是培養(yǎng)基與消化液（0.02%EDTA或0.004%EDTA+0.5%胰蛋白酶液各一半）。主要步驟是消化與分裝。5.動物細胞培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：一便于研究各種物理，化學等外界因素對細胞生長發(fā)育和分化等的影響，二便于對細胞生長及發(fā)育過程的觀察

細胞培養(yǎng)必須滿足兩個條件：一是供給細胞存活所必須的條件，二是嚴格控制無菌條件

6.ABO血型用已知的IgM類特異抗體（標準血清）與被檢紅細胞在室溫條件下、鹽水介質中反應，根據紅細胞是否出現凝集現象來測定被檢紅細胞膜上有無與血型抗體相對應的抗原，從而判斷和鑒定被檢者的血型。大部分為RH陽性。正定型反定型

被

（標準（標準紅細胞+被檢者血

檢

血清+清）

者

被檢者

血

紅細

型

胞）

O型

抗抗A型紅B型紅

紅細

AB細胞細胞

胞

＋－A－＋－－＋B＋－－＋＋AB－－－－－O＋＋－7.細胞融合原理

掌握利用聚乙二醇為介導物對各類細胞的融合方法。聚乙二醇分子能改變各類細胞的膜結構，使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細胞接口處雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，使細胞發(fā)生融合。

影響融合率的因素1.溫度2.PEG分子量3.細胞融合時PEG濃度。4.PEG作用時間5.所要進行融合細胞種類。8.流式細胞儀原理

流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，分析出其體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學特征。作用：1、計數2、測細胞周期3、測特異性蛋白影響其測量效果因素：9.細胞膜屏蔽哪些：

鹽、無機離子、極性大分子。

允許進入：脂溶性、水、非極性、有機小分子、NH4+10.線粒體和液泡的染色

堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料膠粒表面帶陰離子，而被染得部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣他們彼此之間就能發(fā)生吸引作用，一般以堿性染料最為適用，可能因為它具有溶解在脂類的特性，易于被細胞吸收。詹納斯綠B和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和葉泡系的染色各有專一性11.葉綠體分離與熒光觀察將組織勻漿后懸浮在等滲介質中進行差速離心，是分離細胞器的常用方法（先1000r/min2min棄沉淀再3000r/min5min棄上清）12.細胞膜的滲透性原理

將紅細胞放入數種等滲溶液中，由于紅細胞對各種溶質的透性不同，有的溶質可以深入，有的溶質不能滲入，滲入的溶質能提高紅細胞的滲透壓，所以促使水分進入細胞，引起溶血。由于溶質投入速度不同，因此溶血時間也不同。

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血液檢查1

、貧血：單位容積循環(huán)血液中的紅細胞數、血紅蛋白量低于參考值低限，通常稱為貧血2、RBC

病理性↓的意義：（1

）生成不足：a

造血原料不足：缺鐵性貧血、巨幼細胞貧血；b

造血功能障礙：再生障礙性貧血、白血病；c

慢性病性貧血：惡性腫瘤晚期、慢性腎病。（2

）丟失過多：失血性貧血（3

）破壞過多：溶血性貧血3

、貧血的3

個診斷指標：Hb、RBC、Hct

四個鑒別診斷指標：MVC、MCH、MCHC、RDW4、RDW

（紅細胞體積分布寬度）是反映紅細胞體積（大�。┳儺愋裕�離散程度）的參數。RDW

能直接、客觀、及時地反映紅細胞大小不等的程度。

臨床：缺鐵性貧血----RDW升高

地中海貧血-----RDW正常5

、網織紅細胞（Ret）：是晚幼紅細胞脫核介于晚幼紅細胞與成熟紅細胞之間的尚未完全成熟的紅細胞。

臨床：溶血性貧血及失血性貧血Ret多↑↑6

、紅細胞沉降率（ESR）：指紅細胞在一定條件下沉降的速率，即血沉。（一定條件：a血沉管：直立b

一定時間：1小時c

一定溫度：室溫25℃）

臨床：結核、風濕、腫瘤。7

、中性粒細胞（N

）病理性升高：細菌感染、創(chuàng)傷、中毒、溶血出血及腫瘤。8、N

病理性降低：病毒感染、脾亢、血液病、自身免疫病及藥物理化作用。9

、核左移：外周血中桿狀核增多（>5%），并可出現晚幼粒、中幼粒及早幼粒等細胞，稱為核左移。

見于嚴重感染。10

、核右移：正常人外周血中的中性粒細胞以3

葉者為主，中性粒細胞核分葉過多，5葉核

及以上者大于3%

，或多數為4~葉核，稱為核右移。

見于巨幼貧。11

、嗜算性粒細胞（E

）↑：變態(tài)反應性疾�。ㄏ�喘、蕁麻疹）

寄生蟲�。ɑ紫x病、血吸蟲�。�12

、淋巴細胞的病理變化（1

）病理性相對↑：再生障礙性貧血、粒細胞缺乏癥。（）病理性絕對↑：病毒疾病及結核病13

、異型淋巴細胞：淋巴細胞受病毒等因素刺激增生亢進而形成的一種形態(tài)變異的淋巴細

胞，簡稱異淋。

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臨床：異淋↑常見于傳單等病毒感染性疾病。14

、血管壁檢查（1

）毛細血管抵抗力實驗（CRT），又稱束臂實驗

臨床：a

毛細血管壁異常：維生素C

缺乏癥、血管性紫癜

B

血小板異常：血小板無力癥、特發(fā)性血小板降低性紫癜（ITP）（2

）出血時間（BT）：用出血時間測定器在前臂皮膚上造成一個“標準”創(chuàng)口，記錄出血自然停止所需時間。臨床：ab同CRT；c

凝血因子異常：血管性血友�。╲WD）15

、血小板↓（1

）生產↓，見于再障、白血病等（2

）破壞或消耗↑見于ITP、DIC等（3

）分布異常見于脾腫大、血液稀釋16

、活化部分凝血活酶時間（APTT）：37

℃，在血漿中加入活化劑和部分凝血活酶，而后加入Ca2+

，從加入Ca2+

到血漿凝固所需的時間稱為APTT。

意義：APTT

是內源性凝血系統最常用的篩選試驗；除PF3、Ca2+

外的內源性凝血系統因子缺乏

，均可延長APTT。17

、血漿凝血酶原時間（PT）：

37

℃，在血漿中加入組織凝血活酶，而后加入Ca2+

，從加入Ca2+

到血漿凝固所需的時間稱為PT。

意義：PT

是外源性凝血途徑的常用的篩選試驗；Ca2+

外的外源性凝血系統因子缺乏

，均可導致PT

除Ⅲ、延長。18

、纖維蛋白（原）降解產物（FDP）：在纖溶酶作用下，纖維蛋白（原）降解產生的一系

列肽鏈碎片的總稱。

意義：FDP

↑是體內纖溶亢進的標志；不能鑒別原發(fā)性纖溶和繼發(fā)性纖溶。

血漿D--

二聚體（DD）：繼發(fā)性纖溶的標志；溶栓治療的監(jiān)測指標；纖溶亢進的分子標志之一。19

、出血性疾病常見原因

血管壁異常

血小板異常

凝血因子異常

抗凝物質增多

纖溶亢進

CRT;BTPLT;MPVAPTT;PTAT-Ⅲ

FDP;DD

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骨髓細胞學檢查1、骨髓細胞學檢查的臨床意義：各型白血病、惡性組織細胞病、巨幼細胞貧血、再生障礙性貧血、多發(fā)性骨髓瘤。2

、骨髓增生程度的分級

骨髓增生程度

成熟紅：有核細胞

有核細胞%

常見原因

增生極度活躍1：150%以上

各型白血病

增生明顯活躍10：110%以上

增生性貧血、各型白血病

增生活躍20：15%左右正常骨髓

增生減低50：11%以下

非重型再生障礙性貧血

增生明顯減低

300：10.5%以下

重型再生障礙性貧血3

、正常骨髓象：骨髓增生程度為增生活躍。粒紅比值（M:E）為2：1~4:1

。粒系細胞占總有核細胞的40%~60%。4

、常見血液病的細胞學特點

病名

血象

骨髓象

缺鐵性貧血

血紅蛋白減少，紅細胞減少或正常；MCV↓,MCH↓↓,MCHC↓,RDW↑

,WBC,DC,PLT多正常；

網織紅細胞輕度增多或正常。

增生明顯活躍；

粒紅比值減低；

紅細胞系明顯增生，以中、晚幼紅細胞為主；

呈“老核幼漿”核漿發(fā)育不平衡。

巨幼細胞貧血MCV↑,MCH↑,MCHC正常，RDW↑,RBC↓↓；

網織紅細胞輕度增多或正常；

白細胞輕度減少或正常；

血小板計數正�；驕p少，可見巨大血小板。

有核細胞增生明顯活躍；

粒紅比值減低；

紅細胞系明顯增生，以早、中幼紅細胞為主

呈“核幼漿老”核漿發(fā)育不平衡

重型再生障礙性貧血

Hb,RBC,Ret,WBC，PLT

等明顯↓；

三系↓，淋巴相對↑

四少兩多

四少：紅系、粒系、巨核系，骨髓增生程度↓

兩多：淋巴相對↑，非造血細胞↑

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、白血病AL

骨髓象：a

骨髓增生極度或明顯活躍b白血病細胞惡性增生并病變c

白血病裂孔現象d

紅系多受抑制e

巨核系受抑制

AL:

急性淋巴細胞白血病ALL,

簡稱急淋：L1，L2，L3.急性髓系白血病AML:M0~M7

急性淋巴細胞白血病ALL

骨髓象：a

骨髓增生極度或明顯活躍b

淋巴細胞系過度增生，以

原始及幼稚淋巴細胞為主，可有空泡等c

粒系及紅系增上均受抑制，各階段細胞明顯↓d

巨核系受抑制，巨核細胞明顯減少或缺如。

慢性粒細胞白血病CGL：a

血象：白細胞異常增生，以中幼粒以下為主各階段粒細胞；嗜酸性粒細胞顯著增生。B

骨髓象：粒系極度增生，可見以中幼粒以下為主各階段粒細胞增生，嗜堿或嗜酸粒細胞增多。C

染色體檢查：約90%以上CML患者有Ph染色體d

體征：巨脾。

排泄物、分泌物及體液檢查1

、腎小球性蛋白尿：腎小球病變→

腎小球濾過膜通透性增減→

血漿蛋白（尤其是白蛋白）

大量濾出并超過腎小管重吸收的能力。

臨床：腎小球腎炎、腎病綜合征等2

、腎小管性蛋白尿：腎小管病變→

沖吸收能力下降→

小分子蛋白無法重吸收→

隨尿排出。

臨床：間質性腎炎、腎盂腎炎、中毒性腎病等3

、溢出性蛋白尿：血液中異常蛋白質升高，可經腎小球濾過，并超過腎小球重吸收能力而成。

臨床：漿細胞病如多發(fā)性骨髓瘤；急性血管內溶血如血紅蛋白尿4

、腎性糖尿：腎小管對葡萄糖的重吸收能力減退，腎糖閾值降低所致的糖尿，稱腎性糖尿。5

、管型：是蛋白質、細胞或碎片在腎小管、集合管中凝結而成的圓柱狀蛋白聚合體。

透明管型

偶見于正常人細胞管型

常表示病變在急性期

顆粒管型

有淤滯現象，病變在慢性期

蠟樣管型

長期淤滯，病變在后期，見于慢性腎炎晚期、腎衰6

、尿干化學檢測常用項目：PH、蛋白PRO

、葡萄糖GLU、酮體KET、膽紅素BIL、尿膽原URO、隱血BLD

、亞硝酸鹽NIT

、白細胞LEU

、尿液比重SG

、維生素C--（鑒定

GLU/BIL/BLD)7

、隱血：當上消化道少量出血時，肉眼和顯微鏡均不能發(fā)現，稱為隱血。這類出血必須用

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化學方法加以檢測，稱為隱血實驗。8

、漿膜腔積液：a

按性質：漏出液和滲出液

b

按部位：胸腔液、腹腔液、心包腔液、關節(jié)腔液。9

漏出液和滲出液鑒別要點P33410

、常見神經系統疾病的腦脊液特點（1

）化膿性腦膜炎：

肝病常用實驗室檢查1

、白蛋白/

球蛋白（A/G）

1.5:1~2.5:1

，評價肝功能狀態(tài)的重要指標。2

、慢性肝病時，蛋白酶變化？

慢性肝炎、肝硬化等慢性肝病時，肝臟合成白蛋白減少，而單核-巨噬細胞系統因受

刺激合成γ球蛋白增加，A/G

比值發(fā)生變化，嚴重時可出現A/G倒置。3、ALT

（丙氨酸氨基轉移酶）：反映肝細胞損傷的最敏感指標

AST

（門冬氨酸氨基轉移酶）：反映肝細胞損失程度的敏感指標4、ALP

（堿性磷酸酶）：肝、膽、骨骼疾病的酶學指標；膽汁淤滯的酶學指標。5

、γGT(

γ谷氨酰轉移酶）：肝、膽疾病的酶學指標；酒精性肝炎及戒酒的監(jiān)測指標6、MAO

（血清單胺氧化酶）：與體內結締組織增生呈正相關，監(jiān)測MAO

活性可診斷肝臟是否纖維化。

腎功能檢查

內生肌酐清除率Ccr

：測定腎小球濾過功能（正相關）最常用的方法，較早反映。

血肌酐Cr

：反映腎小球濾過功能（負相關）不早期，較特異。

血清尿素BU

：反映腎小球濾過功能（負相關）不早期，不特異。

胱抑素C

：理想可靠的早期反映腎小球濾過功能是否受損的內源性標志物。

糖尿病診斷1、GLU

（血糖）升高：Ⅰ、Ⅱ型糖尿�。ㄗ畛Ｒ姡�；特殊類型糖尿�。▋确置诩膊�，相關基因突變，胰腺外分泌疾�。�；應激性血糖升高；肝源性血糖升高。2、OGTT

（口服葡萄糖耐量試驗）：口服定量葡萄糖，間隔一定時間測量血糖、尿糖水

平，以監(jiān)測血糖調節(jié)功能，猶適于糖尿病疑似者。超出正常范圍：糖尿病、糖耐量減退。

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、糖尿�。―M）：FPG≥

7.0mmol/L2hPG≥

11.1mmol/L尿糖（+）4

、空腹血糖受損：FPG>6.1mmol/L，

OGTT，2hPG≥

11.1mmol/L；（三者之一，可確診）

心腦血管病的實驗診斷1

、血清甘油三酯（TG）、血清總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白(LDL=LDL-C+Apo-B)升

高，動脈粥樣硬化和冠心病等心腦血管病的危險因素。2

、高密度脂蛋白（HDL=HDL-C+Apo-A1)，HDL抗AS；

Apo-A1，抗AS

，是診斷冠心病的敏感指標。3

、肌酸激酶CK：

CK/CK-MB

，最廣泛應用的心肌損傷標志物

心肌肌鈣蛋白cTn-T/I：最敏感最特異的心肌損傷標志物

肌紅蛋白Mb

：最早期的心肌損傷標志物，AMI

除外診斷

B型利鈉肽BNP：預測HF

（心力衰竭）有無及嚴重程度的最準確指標

臨床常用免疫學檢查

一、血清免疫球蛋白IgG：胎傳抗體，既往感染；IgM

：早期診斷，現癥感染；IgA

：粘膜免疫，母乳喂養(yǎng)；IgE

：超敏反應，變態(tài)反應。

二、感染免疫檢查1

、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）：鏈球菌溶血素“O

”具有一定的抗原性，能刺激機體

產生相應抗體，稱為抗鏈球菌溶血素“O”。

意義：（1）ASO

是溶血素O

受刺激產生的抗體（2）ASO

升高可見于扁桃體炎等鏈球菌直接感染性疾�。�3）ASO

升高亦可見于急性腎炎等感染后免疫反應性疾�。�4）ASO(+)

一定是鏈球菌感染，不一定是近期感染。2

、結核分枝桿菌（1

）抗酸染色法：高特異性，低敏感性（2

）細菌培養(yǎng)法：高特異性，高敏感性，高耗時。適于菌種鑒定、藥敏實驗，不適于常規(guī)

========================================第7頁========================================（3

）血清抗體法：適于常規(guī)助診，尤適于肺、腎以外的結核篩選（4）PCR

法：高特異性，高敏感性，高快速性3

、幽門螺旋桿菌（Hp

）可致慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍4、ToRcH

：產前常規(guī)檢查指標To--

剛地弓形蟲R--風疹病毒c---

巨細胞病毒H---

單純皰疹病毒

病原IgM

型抗體是ToRcH

檢查最常用方法5、HIV抗體是ADIS

常規(guī)方法6

、乙肝五項（1）HBsAg+：

已感乙肝病毒（2）

HBsAb+（抗-HBs）：已有免疫力，唯一的保護性抗體（曾注射乙肝疫苗，曾是乙肝患者；曾隱性感染）（3）HBeAg+：HBV

復制活躍；肝臟進行性損害，高度傳染性（4）

HBeAb+：HBV

復制減弱；病情相對穩(wěn)定；傳染性降低（

5）HBcAb（抗-HBe）：IgG

型，既往感染；IgM

型，現癥感染，HBV

持續(xù)復制的指

標，確定窗口期。7

、大三陽：HBsAg、HBeAg、抗-HBc

陽性俗稱“大三陽”，提示HBV

正大量復制，有較強的傳染性8

、小三陽：HBsAg、抗-HBe、抗-HBc

陽性俗稱：小三陽“，提示HBV

復制減少，傳染性降低。

三、自身抗體檢測1

、抗核抗體（ANA）

----

系統性紅斑狼瘡SLE2

、抗雙鏈DNA抗體（dsDNA）----

系統性紅斑狼瘡SLE3、抗-Sm

抗體，為SLE

標志抗體4

、類風濕性關節(jié)炎（RA

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