生化實驗心得

生化實驗心得

劉欣怡201*00140057201*級生物基地班我很喜歡做實驗，并且樂于鍛煉自己的動手能力。

本學(xué)期的生化實驗，雖然只從第二周上到第十五周，但是我收獲了很多并且留下了深刻的印象。對于本次實驗心得的撰寫，我將分為以下3個部分來進(jìn)行：本學(xué)期實驗回顧、本學(xué)期實驗總結(jié)以及對于生化實驗課的支持和建議。一、本學(xué)期實驗回顧：

本學(xué)期的生化實驗課上，我們一共進(jìn)行了11次實驗，分別是Folin-酚試劑法測定血清蛋白質(zhì)含量、酵母RNA的提取、醋酸纖維薄膜電泳、紫外吸收法測定RNA含量、聚酰胺薄膜層析、纖維素酶活力的測定（三硝基水楊酸法）、還原糖和總糖含量的測定（三硝基水楊酸法）、酶最適PH的測定、費(fèi)林試劑熱滴定糖、肌糖原酵解作用、微量凱氏定氮法。這些實驗具有代表性，是典型的生化實驗。在這些實驗中，涵蓋了以前無機(jī)實驗和有機(jī)實驗的基礎(chǔ)實驗操作，還有全新的實驗操作以及實驗儀器。

在這學(xué)期的生化實驗課上，我既復(fù)習(xí)并熟練了大一無機(jī)實驗和有機(jī)實驗的基本實驗操作和儀器（比如移液管、滴定管、蒸餾等），又學(xué)習(xí)并掌握了許多新操作以及新儀器的使用，比如紫外分光光度計、離心機(jī)、聚酰胺薄膜、熱滴定、凱氏定氮儀器等。最重要的是，我學(xué)習(xí)并掌握了一些重要的實驗方法和原理，比如Folin-酚試劑法、紫外吸收法、三硝基水楊酸法、費(fèi)林試劑與糖的反應(yīng)、微量凱氏定氮法等。掌握了這些實驗原理以及方法，有利于我們在以后中靈活運(yùn)用設(shè)計實驗。

總體來說，本學(xué)期生化實驗教會了我測定蛋白質(zhì)、糖、核酸的方法，電泳和層析分離物質(zhì)、如何測定酶的相關(guān)特性、驗證肌糖原酵解作用、如何提取RNA。二、本學(xué)期實驗總結(jié)

通過這學(xué)期的生化實驗，我的實驗技能的到了大大地提升，同時，實驗中的細(xì)節(jié)、注意事項以及老師拓展的知識令我獲益匪淺，也讓我深深地認(rèn)識到科學(xué)是非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)�，尤其是在做實驗的時候，要全神貫注，井井有條，否則很容易出差錯，而這個小小的差錯很有可能就使實驗前功盡棄，既耽誤時間又浪費(fèi)試劑。

回顧這一學(xué)期我的實驗課程，每一次我都能完成實驗任務(wù)。大多數(shù)都比較順利，小組內(nèi)兩人也大多配合默契，但是有一些美中不足的地方。有的一些實驗比較麻煩，實驗步驟較為繁瑣，我們在做實驗時偶爾會產(chǎn)生不耐煩的思想，只想著抓緊結(jié)束，但是在這種時候往往更容易出差錯。我有兩次記憶很深，一次是在測定纖維素酶活力（三硝基水楊酸法）時，沒能及時貼上空白標(biāo)簽，導(dǎo)致又重新制作空白，拜拜浪費(fèi)了時間；另一次是在鑒定肌糖原酵解作用時，實驗步驟較為繁瑣，并且老師對黑板上的簡易實驗步驟進(jìn)行了多個補(bǔ)充，其中一點是要在水浴后取出大塊肉再加下一步驟的試劑，結(jié)果我們當(dāng)時產(chǎn)生了不耐煩情緒，就直接加了試劑而沒有取出大肉塊。對于這兩次情況，雖然對最終的實驗結(jié)果沒有產(chǎn)生什么明顯的影響，但是，它實實在在體現(xiàn)了自己的操作并不是很嚴(yán)謹(jǐn)，需要注意和努力。

在本學(xué)期生化實驗報告的撰寫中，我重點注意老師強(qiáng)調(diào)的實驗分析部分。上課認(rèn)真聽老師的實驗講解并認(rèn)真記錄有關(guān)的可能實驗結(jié)果的分析。在課后撰寫實驗報告時對這些點重點分析和總結(jié)，有時甚至是查找相關(guān)資料然后再進(jìn)行分析。通過這一些列的做法，我的實驗分析能力得到了提升，我能在討論實驗結(jié)果或者實驗操作時找到更好、更精確的切入點，能得出更好的結(jié)論。

同時，本學(xué)期老師將我們分為兩人一組來進(jìn)行實驗，兩人之間的磨合和合作是一種鍛煉，對今后很有幫助。三、對于生化實驗課的支持和建議

我非常感謝老師在這一學(xué)期中的辛勤勞動。老師在課前為我們做好實驗準(zhǔn)備很不容易，配試劑等都很辛苦。謝謝老師您了。

我覺得咱們的額生化實驗課設(shè)計的挺好的。兩人一組可以分工合作，加快實驗效率，同時又避免了因為同組同學(xué)人數(shù)多而有的同學(xué)無事可做的現(xiàn)象。老師在課上講解實驗時，有關(guān)實驗步驟、實驗可能結(jié)果、實驗注意事項的分析、講解和拓展令我獲益匪淺，有利于培養(yǎng)我的實驗思維并且拓寬了知識視野。

建議方面，我想和老師提的一點建議其實是有關(guān)實驗器材方面的。對于老師所提到的有關(guān)節(jié)約試劑、減少材料浪費(fèi)等事項我非常贊同，并且大多數(shù)時候器材和試劑都很全（這和大一的無機(jī)實驗和有機(jī)實驗相比條件進(jìn)步了很多），只是希望咱們的一些其他實驗儀器能更全面一點，舉一個例子，可以使用的紫外分光光度計只有3臺，有些過少，實驗中要等待的時間較長，并且有的儀器還不是很準(zhǔn)確，對于我們的實驗造成了一定的困擾，希望老師能將實驗室內(nèi)有些問題的儀器同一修一修。

總之，我很喜歡咱們的生化實驗課，并且從中學(xué)到了很多知識、實驗方法和應(yīng)用，鍛煉了實驗操作，形成了實驗要耐心、細(xì)心、恒心的觀念。同時還培養(yǎng)了團(tuán)隊意識和合作觀念。我獲益匪淺。

擴(kuò)展閱讀：生化試驗 實驗總結(jié)

山東大學(xué)實驗報告

姓名王賽賽系年級組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實驗題目生化實驗總結(jié)學(xué)號201*14140103

生化實驗總結(jié)

一、實驗感想：

本學(xué)期的十個生化實驗，讓我們學(xué)到了不少新的實驗技能和實驗操

作方法及實驗原理。

酵母RNA的提取及核酸的定量測定讓我們第一次真正的接觸到了對于核酸的一些提取、處理、及研究的方法，例如：利用RNA能溶于堿性溶液的原理來用稀堿法提取RNA，其中對于樣品的處理，以及提取完畢之后堿的中和、乙醇提取、乙醚濾干等操作方法都是以前沒遇到過的。在核酸的定量測定試驗中，我們同樣鞏固了分光光度計的使用方法。在蛋白質(zhì)含量測定的過程中，我們學(xué)習(xí)了兩種方法，一種是folin-酚試劑法，一種是經(jīng)典的凱斯氏定氮法。前者利用folin-酚和酪氨酸和色氨酸的結(jié)合來測定蛋白質(zhì)含量，同時我們也是第一次接觸到了紫外分光光度計，以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定樣本的蛋白質(zhì)濃度。后者實驗原理比較復(fù)雜，但總體來說就是將蛋白質(zhì)中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化成無機(jī)氮（硫酸銨），然后再與堿液反應(yīng)，通過測量氨氣的釋放量來間接測得蛋白質(zhì)的含氮量，然后再求蛋白質(zhì)的含量。這次實驗我們學(xué)會了使用凱氏定氮儀，并且明白了其基本工作原理。本儀器使用方便，效果良好。使用的過程中，由于要長時間做大量的重復(fù)測定，由此也鍛煉了我們堅忍不拔的實驗精神，磨練了意志，同時也經(jīng)過反復(fù)的練習(xí)而增強(qiáng)了有關(guān)該實驗的實驗操作技能，如何緩慢山東大學(xué)實驗報告

姓名王賽賽系年級組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實驗題目生化實驗總結(jié)學(xué)號201*14140103

加液防止倒吸，如何控制蒸汽發(fā)生器防止暴沸，如何按照順序嚴(yán)格的加入試劑，以及如何進(jìn)行滴定等，通過該實驗，對這些技能都有了進(jìn)一步的了解。在醋酸纖維素薄膜電泳的實驗中，我們主要學(xué)習(xí)到的是在復(fù)雜的實驗材料處理的過程中如何保持清醒的頭腦，以及完整的思路，這樣才能把實驗做好，并且做的很快。該實驗要配制緩沖液、漂洗液、染色液、透明液，從薄膜的制作，到點樣，處理、電泳等要經(jīng)過一系列復(fù)雜的實驗操作，每一步都很重要，每一步的處理時間，處理程度都要靠自己去把握，最后還要經(jīng)過漂洗、冷風(fēng)吹干，最后的處理是要及其小心的，否則會把薄膜弄破，或者出現(xiàn)皺縮，不平整。如果前期點樣不好，或者染色、電泳過程中稍有不慎，便的不好較好的電泳條帶，出現(xiàn)拖尾，或斷續(xù)的現(xiàn)象。因此，這個實驗尤其考驗我們的操作能力和細(xì)心水平。酶性質(zhì)實驗是我們接觸到為數(shù)不多的一個定性實驗。

我們從中學(xué)會了對于定性測量的一些處理方法，例如：如何確定最佳ph？如何確定ph梯度比較合適？如何確定最佳保溫時間？這些問題都從試實驗中得到了解答。最后是通過顏色反應(yīng)來判斷最適宜ph，準(zhǔn)確判斷顏色深淺是一個方面，更重要的是顏色指示劑的加入量要絕對控制好，如果加的太多，則會使所有的試管顏色偏深，甚至都變成黑色，如果加的太少，那么染色就太淺，變色不明顯，所以，太深太淺都不適于顏色梯度變化的觀察。由此可知，在以后的類似試驗中尤其要控制指示劑的加入量，力求達(dá)到一個最佳的顏色梯度。肌糖原酵山東大學(xué)實驗報告

姓名王賽賽系年級組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實驗題目生化實驗總結(jié)學(xué)號201*14140103

解作用實驗中，我們不僅學(xué)到了鑒定糖酵解作用的原理和方法，還學(xué)到了在有關(guān)組織代謝實驗時應(yīng)該注意的一些問題。本實驗將肌糖原轉(zhuǎn)變成乳酸，然后通過測定乳酸的生成量來反應(yīng)糖原的酵解。實驗最后要經(jīng)過顏色反應(yīng)來判斷是否有乳酸生成，該反應(yīng)相當(dāng)靈敏，所以實驗儀器要嚴(yán)格的洗干凈。記得我們這次實驗時，第一次由于沒有洗凈試管，所以導(dǎo)致空白組也出現(xiàn)了顏色反應(yīng)，后來老師讓用濃硫酸洗過一次試管，然后才得到了正確的實驗結(jié)果，這是在這次試驗中收獲最大的地方。在纖維素酶活力的測定試驗中，第一次學(xué)習(xí)到了空白對照實驗，知道了空白對照實驗的作用，同時對于標(biāo)準(zhǔn)曲線和分光光度計的使用已經(jīng)比較熟練了。薄膜層析和柱層析實驗都是分離實驗，兩種層析方法比較學(xué)習(xí)，對于層析又有了進(jìn)一步的認(rèn)識，柱層析的實驗中，最主要的還是層析柱的制作，和點樣，加樣量不要過大，過大，分離條帶過寬，如果層析柱不夠長，各組分不易分開，易同時洗脫下來（本實驗只分離一種色素，不存在此問題）；加樣量過少，色帶不是很清楚，不易觀察，效果不好。最后，菲林熱滴定定糖法實驗，該實驗也要做空白測定，將樣品液換成蒸餾水，正確理解空白測定的作用，然后就是熱滴定過程，該滴定不同于以往的滴定實驗，要趁熱滴定，并且要保持滴定時間一直，防止空氣中的氧氣對實驗結(jié)果造成影響，還有，提前加入葡萄糖的作用，是為了減少滴定過程中的加入量，縮短滴定時間，增強(qiáng)滴定準(zhǔn)確度。最后還有在滴定時候顏色的變化，通過親自的觀察對顏色的變化深有體會。山東大學(xué)實驗報告

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通過這學(xué)期的一系列實驗，我們學(xué)到了好多實驗技能，同時也發(fā)現(xiàn)了不少的問題，以及理論知識的缺乏，我以后會更加努力，不斷成長。

二、72型分光光度計

1、72型分光光度計原理：

72型分光光度計是可見光分光光度計，波長范圍為420nm～700nm，它由三大部分組成:磁飽和穩(wěn)壓器、光源、單色光器和測光機(jī)構(gòu)、微電計。它的基本依據(jù)是朗伯比耳定律，它是根據(jù)相對測量原理工作的，即先選定某一溶劑作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定其透光率為100%，被測試樣的透光率是相對于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言的，即讓單色光分別通過被測試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液，二者能量的比值就是在一定波長下對于被測試樣的透光率。如圖所示，白色光源經(jīng)入射狹縫、反射鏡和透光鏡后，變成平行光進(jìn)入棱鏡，色散后的單色光經(jīng)鍍鋁的反射鏡反射后，再經(jīng)過透鏡并聚光于出射狹縫上，狹縫寬度為0.32nm。反射鏡和棱鏡組裝在一可旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤上并由波長調(diào)節(jié)器的凸輪所帶動，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器便可以在出光狹縫后面選擇到任一波長的單色光。單色光透過樣品吸收池后由一光量調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)為適度的光通量，最后被光電電池吸收，轉(zhuǎn)換成電流后由微電計指示，從刻度標(biāo)尺上直接讀出透光率的值。2、為什么要做空白?

分光光度計測的是溶液的總體吸光度，而待測溶液中除了待測物質(zhì)外還有其他的一些雜質(zhì)等，會給實驗帶來一定的誤差，用空白組調(diào)0.可以消除由于溶液本身的吸光性質(zhì)給實驗帶來的影響，確保吸光度山東大學(xué)實驗報告

姓名王賽賽系年級組別同組者陳燕紅王梓科目生物化學(xué)實驗題目生化實驗總結(jié)學(xué)號201*14140103

的差異僅僅是由于溶液中待測物質(zhì)濃度的不同而引起的。3、T為什么只能用1-100的數(shù)，而不能用超過100的數(shù)？

因為他表示透光度，在調(diào)節(jié)100%之后最大的透過率即使空白的100，其他的只能比空白小，超過100表示光沒有透過樣本而直接穿過空當(dāng)，所以不能用超過100的。

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