1儀器與材料

　　高效液相色譜儀，P680A，美國戴安；UV-1100紫外分光光度計，北京瑞利分析儀器有限公司；751G分光光度計，上海分析儀器廠；電子天平，0.0001g/0.00001g,XR205SM-DR，瑞士普利賽斯。滲漉筒，500ml，自制。

　　防己，購于成都市荷花池藥材市場，產(chǎn)地：浙江，含粉防己堿1.13%；粉防己堿對照品，含量測定用，批號0711-20005，中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品；乙醇，醫(yī)用，95%，購于宜賓�？邓帢I(yè)瀘州分公司；其余試劑均為分析純。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1方案設(shè)計經(jīng)驗及預(yù)實驗結(jié)果表明，滲漉工藝的主要影響因素為乙醇濃度、浸泡時間、乙醇倍數(shù)、滲漉速度等，故選定以上4個考察因素，每個因素設(shè)三水平，以防己總堿、粉防己堿的提取率為評價指標（權(quán)重系數(shù)均為0.5），按L9(34)正交表實驗，表頭設(shè)計見表1。表1因素水平（略）

　　稱取防己粗粉100.0g，加入1倍量相應(yīng)濃度的乙醇，攪拌均勻，密閉放置2h,待藥粉充分膨脹和潤濕后，裝筒，按《中國藥典》2005年版滲漉法［1］實驗，加入相應(yīng)濃度的乙醇，浸泡12～48h，開始滲漉，流速1～5ml·min-1·kg-1，收集相應(yīng)量的滲漉液，并用相同濃度的乙醇定容到1000ml，得樣品液（含生藥0.1g/ml）。

　　2.2總生物堿的含量測定

　　2.2.1貯備液的制備精密稱取5mg粉防己堿對照品，至10ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻（0.496mg/ml）。

　　2.2.2最大吸收波長的選擇精密稱取粉防己堿對照品1mg，置25ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，精密吸取0.2ml，置10ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。采用紫外分光光度法，在波長200～400nm處進行掃描，結(jié)果見圖1。粉防己堿的最大吸收波長為282nm。

　　2.2.3標準曲線的繪制分別精密量取貯備液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml，置10ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。以乙醇為空白，在282nm處測定吸收度，根據(jù)測定結(jié)果繪制標準曲線，并求得回歸方程：A=12.949309C-0.063,相關(guān)系數(shù)r=0.99998。

　　2.2.4樣品的測定分別精密量取樣品溶液5ml,置100ml燒杯中，水浴蒸干，殘渣加混合溶劑（乙醚：氯仿：乙醇：10%氨水，25∶8∶2.5∶1）40ml，攪拌后浸泡10min，超聲處理10min，放置片刻，傾濾，殘渣用混合溶劑洗滌3次，5ml/次，濾液水浴蒸干，殘渣用乙醇溶解并定容至25ml，精密量取上述溶液1ml，置10ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，以乙醇作空白，于282nm處測定吸收度，計算總生物堿含量。結(jié)果見表2。

　　2.3粉防己堿含量測定

　　2.3.1色譜條件色譜柱為DikmaKromasilC18(250mm×4.6mm,5μm),流動相為乙腈∶甲醇∶0.06%二乙胺溶液（60∶20∶20），檢測波長282nm，流速1.0ml/min,進樣量10μl。

　　2.3.2對照品溶液的制備精密稱取粉防己堿對照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻（1mg/ml）。

　　2.3.3供試品溶液的制備精密量取樣品液10ml，置50ml蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣，用流動相溶解，轉(zhuǎn)入25ml量瓶，加流動相至刻度，搖勻，離心，取上清液，0.22μm濾膜過濾。

　　2.3.4標準曲線的制定取上述對照品溶液用流動相稀釋，制備成每毫升含0.05，0.10，0.25，0.50，0.75，1.00mg粉防己堿的系列標準溶液，按上述色譜條件分別進樣5μl，以粉防己堿的峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標作圖，求得粉防己堿的回歸方程為：A=63.8738C-0.3118，r=0.9998，粉防己堿濃度在0.05～1.0mg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

　　2.3.5測定分別精密吸取對照品溶液(0.25mg/ml)與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀，測定，按外標法計算含量，即得。液相色譜圖見圖2～3，測定結(jié)果見表2，方差分析見表3。表2防己滲漉正交實驗表及結(jié)果（略）表3方差分析（略）

　　直觀分析及方差分析表明，乙醇濃度對防己的滲漉工藝有極顯著影響，故選擇最佳濃度A1，而B，C，D因素對工藝的影響較小，從方便生產(chǎn)、節(jié)約成本的角度，選擇浸泡24h,(B2)，收集6倍量滲漉液（C1），滲漉速度為快速（D3）。即A1B2C1D3。據(jù)此條件，驗證3批。結(jié)果見表4。表4驗證實驗（略）

　　3討論

　　在方法學(xué)研究中，參照文獻資料我們考察了∶甲醇-水(40∶60)，甲醇-水-二乙胺(82∶18∶0.2)，甲醇-水(83∶17，含0.5g/L的三乙胺)，甲醇-乙腈-水-二乙胺(65∶25∶10∶0.08)，甲醇-乙腈-0.003moL/LKH2PO4-二乙胺(55∶25∶20∶0.06)等多種流動相系統(tǒng)，結(jié)果表明本文方法分離度好，分離效能高。流動相中加入少量二乙胺，能較好地改善分離度，并使峰形更好。

　　驗證實驗的結(jié)果表明，優(yōu)選工藝收得率與正交實驗結(jié)果接近，但優(yōu)選工藝節(jié)約了乙醇，減少了時間，降低了生產(chǎn)成本，粉防己堿的提取率達到了83%，說明本工藝合理可行，適用于大生產(chǎn)。

　　從實驗結(jié)果看，隨著防己總堿提取率的增高，粉防己生物堿的提取率也相應(yīng)增高，說明兩者的含量之間有一定對應(yīng)關(guān)系。

　　防己總堿的檢測參照文獻方法［3］，采用了混合溶劑�？梢杂行У乇苊怆s質(zhì)干擾。

　　【參考文獻】

　�。�1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：101，附錄IV.

　�。�2］陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用Ⅰ［M］.北京：學(xué)苑出版社，1995：322.

　　［3］施大文，王志偉，畢兆岐，等.中藥粉防己堿中生物堿含量的薄層-分光光度法評價［J］.上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1984，11（4）：284.

　　【摘要】目的研究防己滲漉提取的最佳工藝。方法以防己總堿和粉防己堿為考察指標，采用正交實驗法對防己的滲漉工藝進行研究。結(jié)果確定了最佳工藝條件為浸漬24h，60%乙醇6倍量滲漉，滲漉速度為快速。結(jié)論工藝合理可行，可應(yīng)用于生產(chǎn)。

　　【關(guān)鍵詞】防己滲漉正交實驗總生物堿粉防己堿

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